在体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的治疗过程中，有10%~20%的周期会发生受精完全失败的情况^[1]。对近几年的文章进行系统荟萃分析，结果提示，与常规受精相比，短时受精可以提高临床妊娠率和胚胎种植率^[2]。由于常规IVF受精失败后转行ICSI临床效果的报道存在差异^[3-4]，我们回顾性收集2013年1月~2015年1月期间在我中心接受IVF 治疗，常规IVF 受精失败后转行ICSI的患者77例（观察组），与同期使用男方射出精液直接行ICSI的3295例患者（对照组）的相关资料，比较两组患者的临床数据，探讨常规IVF失败联合早期ICSI补救的临床应用价值及该部分患者再次直接ICSI周期是否有助于妊娠结局的改善。

1 资料和方法 1.1 研究对象

2013年1月~2015年1月期间在我中心接受IVF治疗，常规IVF受精失败后转行ICSI的77周期（观察组），与同期使用男方射出精液直接行ICSI 的3295 个周期（对照组）作为研究对象。两组患者中的女方均为首次进行体外受精的患者。常规IVF失败的标准为：加入精子后6 h观察第2PB释放，所有成熟卵母细胞均无双PB判断为完全受精失败，即刻行补救性ICSI。直接ICSI的标准为：精液分析为严重少精、弱精、畸形精子症，排除染色体异常者。同时分析了其中17位患者在第1周期行常规IVF受精失败联合早期补救性ICSI后行胚胎移植未妊娠与该患者重复周期直接ICSI的临床相关数据进行分析。

1.2 研究方法 1.2.1 控制超排卵

所有患者均采用长方案或短方案进行超排卵，B超监测患者的卵泡生长情况，当患者主卵泡直径≥18 mm时，肌注10 000 U人绒毛膜促性腺激素（hCG），36 h后在B超指引下经引道取卵。

1.2.2 精液准备

男方禁欲3~5 d后以手淫方式取精，并参照WHO标准^[5]对精液进行常规分析和形态检测，采用梯度离心和上游法收集精子，IVF时精子加入卵母细胞周围的精子浓度为（5~10）×10⁵/mL。对于对于严重少精症（1次射精的活精子浓度＜1×10⁶/mL）或少弱畸精症（精子浓度＜20×10⁶/mL，同时a+b级精子活动率＜20%和（或）异常形态精子>85%）或弱畸精症（精子浓度>20×10⁶/mL，形态正常精子＜10%或a+b级精子＜50%）或精液处理后a+b级运动活精浓度＜1×10⁶/mL者行正常ICSI。

1.2.3 加精后观察

获卵后3 h按10 000精子/卵母细胞的比例加入精子，精卵共孵育3 h，加入精子后6 h观察第2PB释放，所有成熟卵母细胞均无双PB判断为完全受精失败，即刻行补救性ICSI。ICSI后18 h观察原核，42 h观察卵裂。

1.2.4 胚胎选择和移植

72h后观察胚胎发育情况并选择优质胚胎，在B超引导下经阴道移植入子宫。

1.2.5 妊娠确认

胚胎移植后14 d检测血中hCG浓度，若阳性则诊断为生化妊娠；移植后30 d B超检查见宫内孕囊并有胎心管搏动诊断为临床妊娠。

1.3 统计学方法

计量资料采用t检验；计数资料采用χ²检验；所有分析使用SPSS 16.0统计软件，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 两组患者的基本情况比较

观察组患者平均年龄33.27±3.79岁，平均不孕年限5.75±2.21年；对照组患者平均年龄34.09±4.19岁，平均不孕年限6.04±3.63年。两组患者的男方年龄、女方年龄、不孕年限、Gn总量和取卵数之间无统计学差异（P＞0.05，表 1）。

2.2 IVF失败后转行ICSI与本中心同期ICSI情况比较

观察组839 个成熟MII 卵子行早期补救性ICSI，2PN 率69%、优胚率89.2%、临床妊娠率48%。同期3295 个ICSI 周期2PN率77%、优胚率73%、临床妊娠率55%（表 2）。

2.3 两组助孕情况比较

观察组的卵裂率为（97.13±5.65）%，高于对照组（91.66±8.92）%，差异有统计学意义（P＜0.05）；移植胚胎数为2.67±0.45个，高于对照组2.10±0.50个，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组间正常受精率、优质胚胎率、生化妊娠率和临床妊娠率之间无统计学（P＞0.05，表 3）。

2.4 同一患者短时受精联合补救ICSI移植周期未妊娠与该患者重复周期直接ICSI数据分析

整理所有77 例短时IVF 受精失败联合早期补救ICSI助孕失败的病历，其中后续有直接ICSI重复周期的病历17个，对比其第1周期及重复周期的临床数据：2PN 率明显提高（69%/73.2%）；优质胚胎率提高（89.2%/67.7%）；17位重复周期直接ICSI的患者中有3例获得了临床妊娠。

3 讨论

在IVF过程中，平均受精率超过70%，但由于受很多因素的影响，任何一个环节的失误都有可能导致受精失败^[7]。国外报道IVF周期中受精完全失败或受精率＜20%的发生率约为10%~20%^[8]，国内报道3%~5%^[9]。造成受精失败的原因可能包括：男性方面，精子功能低下，精子与卵子透明带结合和穿透能力低下或完全障碍是受精失败的主要因素^[10]；女性方面则是由于卵母细胞透明带表面以及细胞质膜表面缺乏精子受体造成精卵结合障碍导致不能受精^[10]。

在常规IVF受精失败后，是否转行ICSI治疗一直存在争议，李晓虹等^[11]研究表明，IVF失败后行补救性ICSI，妊娠率仅为7.75%（11/142），且仅有4 例成功分娩。以往补救性ICSI一般在IVF加精后18~22 h，此时卵细胞已老化，对受精和胚胎发育产生影响。若将实施补救ICSI的时间提早到卵细胞老化之前，就可能提高胚胎发育潜能和临床结局^[12]。本研究在77个受精失败周期联合早期补救ICSI 的时间均控制在6 h 内，发现IVF失败后转行ICSI，受精率（69%）略低于同期因男方因素直接ICSI患者的受精率（77%），卵裂率和优质胚胎数与同期直接ICSI 患者略高，与前人的研究结果相似^[13-14]，但是临床妊娠率却低于常规ICSI的患者。故本研究认为IVF受精失败后直接转行ICSI补救可以降低周期取消率但是对于妊娠结局的改善还需更大样本量数据进行分析。目前认为再次ICSI后低的妊娠率与卵子老化，胚胎与子宫内膜不同步有关^[4]。本研究中对第1周期短时受精失败联合早期补救ICSI周期未妊娠的患者与该患者后续知己ICSI 周期的相关数据进行分析，受精率及卵裂率和优质胚胎率较直接ICSI周期没有明显差别甚至略高，但是17例重复周期患者中仅有3例获得了临床妊娠，临床妊娠率（17.6%），远低于本中心直接因男性因素而行ICSI 助孕的患者临床妊娠率55%。因此，针对于短时IVF受精失败的这部分患者的妊娠结局是否还受其他相关因素影响有待于我们在以后的工作中继续观察及分析。