摘要: 目的观察营养缺乏对人非小细胞肺癌A549及95D细胞自噬活性的影响,建立A549及95D细胞的自噬模型。方法以
EBSS缓冲液代替1640 完全培养基,饥饿诱导处于对数生长期的A549 及95D细胞0、1、2、3、4、5 h 后,采用单丹磺酰戊二胺
(MDC)荧光染色法检测细胞内自噬泡的形成,并采用Western blot方法检测自噬特异性基因微管相关蛋白1轻链3(LC3)和自
噬相关基因Beclin1 的蛋白表达水平。结果饥饿处理A549 及95D细胞后,胞内MDC荧光颗粒逐渐增多,饥饿4 h 达峰值;
Beclin1的表达及LC3-II与LC3-I蛋白表达量的比值(LC3-II/LC3-I)随着饥饿时间的延长逐渐增加,分别在饥饿3 h和4 h达峰
值。结论营养缺乏可以诱导增强A549及95D细胞的自噬活性,在饥饿4 h时细胞自噬水平达峰值;成功构建了营养缺乏诱导
的人肺癌细胞自噬模型,为深入研究自噬在非小细胞肺癌发生发展过程中的作用及其机制奠定了良好的基础。