南方医科大学学报 ›› 2006, Vol. 26 ›› Issue (06): 730-733.
安政雯; 刘宏伟; 贾志敏; 李照峰; Staffan Strmblad; 张宏权;
AN Zheng-wen1,2, LIU Hong-wei1,3, JIA Zhi-min4 , LI Zhao-feng1, Staffan Strmblad2, ZHANG Hong-quan2 Department of Stomatology, Nanfang Hospital1, College of Pharmacy4, Southern Medical University, Guangzhou 510515,China; 2Karolinska Institute Department of Biosciences and Nutrition, Huddinge SE-141 57, Sweden; 3Affiliated Dental School of Tongji University, Shanghai 200072, China
摘要: 目的克隆PAK5-N端基因并诱导其表达,进行多克隆抗体制备,为研究其在牙胚细胞中的生物学功能奠定基础。方法根据人全长PAK5cDNA序列,设计引物;利用PCR技术,以PAK5全长cDNA为模板扩增PAK5-N端基因,将扩增产物克隆至pGEX-4T-1载体中,经EcoRI/XhoI双酶切后进行重组质粒鉴定,DNA测序。以硫代半乳糖苷诱导其在大肠杆菌BL21中表达。利用GST融合蛋白纯化系统进行蛋白纯化,通过免疫家兔制备多克隆抗体,并在牙胚细胞中进行了初步研究。结果和结论成功克隆了PAK5-N端基因,在E.coli中表达了PAK5-NT,并纯化了GST融合蛋白,制备了PAK5特异性抗体。Westernblotting表明PAK5在牙胚细胞中过度表达,为其在口腔细胞中的生物学功能研究提供了依据。
中图分类号: