摘要： 摘要：目的构建携带Rheb和Rheb’D60K突变基因的重组慢病毒载体,并鉴定其在MCF-7细胞中的表达效果，观察其对肝癌细
胞凋亡的影响。方法PCR法扩增Rheb和Rheb’D60K突变基因，构建重组质粒LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K，脂质体法将
重组慢病毒载体和包装质粒混合物共转染HEK-293 FT 细胞，包装产生慢病毒颗粒。将病毒感染MCF-7 细胞后Western
blotting检测Rheb及PS6蛋白的表达；将病毒感染SK-HEP-1细胞饥饿处理后观察其凋亡情况。结果PCR及测序表明成功构
建了LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K重组慢病毒载体。Western blotting 结果显示慢病毒LV31-Rheb-WT感染的MCF-7 细
胞内Rheb下游的PS6蛋白表达多于慢病毒LV31-Rheb-D60K感染的MCF-7细胞。显微镜下慢病毒LV31-Rheb-D60K感染的
SK-HEP-1 细胞饥饿后凋亡数目多于慢病毒LV31-Rheb-WT 感染的SK-HEP-1 细胞。结论本研究成功构建了Rheb 和
Rheb’D60K突变基因重组慢病毒载体,初步观察到该突变基因重组慢病毒载体可诱导肝癌细胞凋亡，为进一步研究Rheb基因在
肝癌发生发展中的作用，进而开展肝癌的临床靶向治疗研究奠定了基础。