南方医科大学学报 ›› 2023, Vol. 43 ›› Issue (4): 527-536.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2023.04.04
刘 芳,彭岚竹,席菁乐
LIU Fang, PENG Lanzhu, XI Jingle
摘要: 目的 探讨肌球蛋白重链9(MYH9)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和对顺铂敏感性的影响并探讨其作用机制。方法 常规培养6株NSCLC细胞系(A549、H1299、H1975、SPCA1、H322、H460)和1株正常支气管上皮细胞系(16HBE)采用Western blot法检测MYH9的表达情况;采用免疫组织化学染色法检测NSCLC患者组织MYH9的表达,实验分为癌组织(49例)和癌旁组织(43例);常规培养H1299和H1975细胞系,使用CRISPR/Cas9技术构建MYH9敲除的NSCLC细胞系,实验分为sgNC组,sgMYH9组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、克隆形成实验检测敲除MYH9对肺癌细胞增殖的影响;Western blot实验、细胞凋亡流式细胞术检测MYH9对细胞凋亡的影响;通过IC50法检测敲除MYH9的肺癌细胞对顺铂敏感性的影响,实验分为sgNC组、sgMYH9组;培育小鼠肿瘤异种移植物模型验证MYH9体内生物学功能,实验分为sgNC组、sgMYH9组。结果 与癌旁组织相比,MYH9在癌组织中上调(P<0.001),高表达患者具有更短的生存(P=0.023)。敲除MYH9抑制细胞增殖(P<0.001),促进细胞凋亡(P<0.05),增加对顺铂的化学敏感性。此外,MYH9的耗竭显著抑制了体内肿瘤生长(P<0.001)。分子机制表明,敲除MYH9使AKT/c-Myc轴失活(P<0.05),从而抑制BCL-2样蛋白1的表达(P<0.05),促进BH3相互作用结构域死亡激动蛋白和凋亡调节剂BAX的表达(P<0.05),并激活胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9(P<0.05)。结论 MYH9通过AKT/c-Myc轴调节细胞凋亡,从而促进NSCLC进展。