南方医科大学学报 ›› 2021, Vol. 41 ›› Issue (8): 1125-1130.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2021.08.01
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陈 蕊,张玉荣,陈 鹏,庞依心,李宏宝,陈子溦,张小用,张鸿毅,李武军
CHEN Rui, ZHANG Yurong, CHEN Peng, PANG Yixin, LI Hongbao, CHEN Ziwei, ZHANG Xiaoyong, ZHANG Hongyi, LI Wujun
摘要: 目的 探讨小核非编码RNA 7SK在胚胎干细胞(ESCs)增殖中的作用,为原始侏儒症疾病的早期诊治提供靶点。方法 利用CRISPR/Cas9系统转染ESCs,通过PCR产物测序和甘油梯度分析鉴定每个单克隆细胞系获得7SK 128-179 突变体。使用慢病毒系统敲除CDK9,然后通过Western blotting分析敲除效率和相关通路蛋白的变化。结果 CRISPR/Cas9系统转染后,ESCs中出现128-179 nt缺失突变的7SK,该突变导致ESCs增殖缺陷。7SK 128-179 nt突变的ESCs中LARP7和CDC6的蛋白水平显著下调,通过干预CDK9的活性发现7SK对ESCs增殖的调控作用依赖于CDK9的活性。结论 7SK 128-179 nt截短体可通过下调 CDC6 严重影响ESCs的增殖,且这一过程依赖于CDK9活性,提示7SK截短突变可作为侏儒症的早期筛查和治疗靶点。