南方医科大学学报 ›› 2020, Vol. 40 ›› Issue (12): 1784-1792.doi: 10.12122/j.issn.1673-4254.2020.12.13
黄柳维,沈燕婷,刘崇斌,李彩珍,王 骏
摘要: 目的 探讨Palbociclib药物对肾小管上皮细胞周期进展及细胞增殖的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞HK-2分别给予不同浓度(0、1、5、10、20 μmol/L)的Palbociclib进行处理,通过细胞计数和CCK8法检测不同浓度及时间下Palbociclib对HK-2细胞增殖及细胞活力的影响。EDU染色检测不同浓度下Palbiciclib对HK-2细胞作用5 d后的细胞增殖情况。流式分析检测Palbociclib对HK-2细胞生长周期分布的影响。采用SA-β-Gal、C12FDG等衰老染色技术检测不同浓度下Palbociclib作用于HK-2细胞5 d后其对衰老表型的诱导情况。RT-PCR检测P16、P21、P53及衰老相关分泌表型的mRNA相对表达水平,Western blot检测P16、P21和P53的蛋白表达情况。结果 Palbociclib抑制HK-2细胞增殖并诱导细胞周期阻滞于G1期。相比于对照组而言,高剂量(10 μmol/L)的 Palbociclib 可明显抑制 HK-2 细胞增殖活性,且在第 5 天时增殖抑制效果最为明显(P<0.01)。Palbociclib诱导HK-2细胞生长周期主要阻滞于G1期,而进入S期的细胞数相比于对照组来说明显减少(P<0.01)。Palbociclib可诱导HK-2细胞发生衰老,通过SA-β-Gal和C12FDG衰老染色检测,结果表明在Palbociclib作用下,HK-2细胞的胞内衰老相关半乳糖苷酶活性明显升高。RT-PCR及Western blot结果显示Palbociclib可明显上调HK-2细胞中P16、P21、P53等衰老相关因子的基因和蛋白表达水平(P<0.01)。与对照组相比,RT-PCR检测Palbociclib作用下的HK-2细胞中衰老相关分泌因子的基因表达水平也升高(P<0.01)。结论 Palbociclib可通过抑制HK-2细胞生长并阻滞其细胞周期进程进而诱导HK-2细胞发生衰老。