南方医科大学学报 /oa 护肝清脂片药物血清对非酒精性脂肪肝细胞模型内质网应激的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111277 目的探讨护肝清脂片药物血清对混合脂肪酸诱导的非酒精性脂肪肝HepG2细胞模型内质网应激(ER stress)的影响及其 可能机制。方法油酸和棕榈酸以2∶1比例混合制备成1 mmol/L游离脂肪酸(FFA)混合液,诱导HepG2细胞24 h发生脂肪变 性,建立NAFLD体外模型,将HepG2细胞分为对照组(CON)、FFA组、护肝清脂片低剂量组(HG-L)、护肝清脂片中剂量组(HGM) 、护肝清脂片高剂量组(HG-H)及非诺贝特阳性对照组(FF),在加入1 mmol/L FFA前分别加入各组对应的药物血清作用 24 h,CON组及FFA组则加入大鼠空白血清作为对照。油红O染色观察细胞内脂滴分布;试剂盒检测细胞内甘油三酯(TG)含 量及培养上清液谷草转氨酶(AST/GOT)、谷丙转氨酶(ALT/GPT)的水平;透射电镜观察细胞内质网形态结构的改变;Western blot、qRT-PCR技术检测ERS相关信号分子GRP78、PERK、p-PERK、ATF6、ATF4、XBP-1、CASPASE-12、CHOP、PKC-δ、p-PKC-δ 蛋白及(或)mRNA的表达情况。利用siRNA 瞬时转染技术沉默PKC-δ在HepG2细胞中的表达后观察GRP78、PERK、p-PERK、 CASPASE-12和CHOP蛋白表达变化。结果与CON组相比,FF组HepG2细胞油红染色可见红色脂滴密布细胞质,TG、AST、 ALT含量升高(P<0.001);与FF组相比,HG-L、HG-M、HG-H及FF均在不同程度上降低TG、AST、ALT含量,减少细胞内脂滴堆 积,差异有统计学意义(P<0.05),并能够在蛋白及mRNA水平上有效地下调ERS相关信号分子GRP78、p-PERK、ATF6、ATF4、 CHOP、CASPASE-12、XBP-1、PKC-δ、p-PKC-δ的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。在1 mmol/L FFA共同作用下,PKC-δ siRNA转染组GRP78、p-PERK、CHOP、CASPASE-12蛋白表达均较对照组明显下调,差异具有统计学意义(P<0.001)。然而,与 PKC-δ siRNA +FFA组相比,PKC-δ siRNA+HG-H组GRP78 和P-PERK表达下调更显著(P<0.001,0.01),CHOP和CASPASE- 12则无统计学差异(P>0.05)。结论护肝清脂片药物血清可以有效地防治混合脂肪酸诱导的NAFLD细胞模型脂肪变性,改善 HepG2功能状态,有效地缓解1 mmol/L游离脂肪酸所致的内质网应激,其作用机制在一定程度上与下调PKC-δ表达有关。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1277 1261173 杨妙婷,陈芝娟,肖淳欣,唐外姣,周本杰 线粒体乙醛脱氢酶2通过下调CaN-NFAT3信号通路拮抗高糖引起的乳鼠心肌细胞损伤 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111288 目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)-活化的T细胞核因子(NFAT)3通路是否介导乙醛脱氢酶(ALDH)2对高糖处理的乳鼠 心室肌细胞的作用。方法无菌条件下取出生3 d内SD大鼠乳鼠心脏,心尖部剪碎并用胰蛋白酶和胶原酶2混合酶消化成单个 细胞,经差速贴壁后并在培养液中加入5-Brdu进行培养,当其生长呈融合状态时对心室肌细胞进行处理。应用免疫荧光检测培 养的乳鼠心肌细胞内α-SA蛋白以此鉴定原代培养心室肌细胞纯度;实验涉及如下分组:5.5 mmol/L糖对照组(M)、30 mmol/L 高糖组(MH)、30 mmol/L 高糖加乙醛脱氢酶2 激动剂(Alda-1)组(MHA)、30 mmol/L 高糖加乙醛脱氢酶2 抑制剂(Daidzin)组 (MHD)、30 mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂(Alda-1)和NFAT3抑制剂(11R-VIVIT)组(MHAV);荧光探针检测细胞内钙离 子浓度;ELISA测定细胞内CaN含量;Western blot检测ALDH2、CaN、NFAT3蛋白表达。结果与M组相比,MH组ALDH2蛋 白表达降低(P<0.05),CaN蛋白表达增高(P<0.05)、NFAT3蛋白表达以及细胞内CaN含量、Ca2+浓度均增高(P<0.01);与MH组 相比,MHA组Ca2+浓度降低(P<0.05)、细胞内CaN含量降低(P<0.01)、CaN蛋白和NFAT3蛋白表达降低(P<0.05)、ALDH2蛋白 表达增加(P<0.05),MHD组Ca2+浓度升高(P<0.01)、细胞内CaN含量升高(P<0.05);与MHA组相比,MHAV组的ALDH2蛋白 表达量无明显变化(P>0.05),NFAT3蛋白表达量降低(P<0.05)。结论线粒体ALDH2对高糖诱导的乳鼠心肌细胞起保护作用, 其机制可能与ALDH2对Ca2+-CaN-NFAT3信号通路的负调节作用有关。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1288 1024938 郭建路,康品方,朱磊,孙硕,陶敏,张恒,唐碧 丙泊酚合并低氧通过p38通路损伤未成熟大鼠的认知功能 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111294 目的探讨丙泊酚合并低氧对未成熟大鼠认知功能的影响及与p38通路、tau蛋白的关系。方法将90只7日龄(P7)SD大鼠 随机分为丙泊酚低氧组、丙泊酚空气组、丙泊酚氧气组、脂肪乳低氧组、脂肪乳空气组、脂肪乳氧气组。丙泊酚低氧组、丙泊酚空气 组、丙泊酚氧气组幼鼠腹腔注释丙泊酚50 mg/kg,脂肪乳低氧组、脂肪乳空气组、脂肪乳氧气组幼鼠腹腔注射脂肪乳5.0 mL/kg, 1次/d,连续7 d。每次注射完毕后分别放入氧浓度为18%、21%、50%的暖箱(38 ℃),待幼鼠翻正反射完全恢复后放回鼠笼。另 取90只P7大鼠分为阻滞剂加丙泊酚低氧组、阻滞剂加丙泊酚空气组、阻滞剂加丙泊酚氧气组、阻滞剂加脂肪乳低氧组、阻滞剂 加脂肪乳空气组、阻滞剂加脂肪乳氧气组,腹腔注射p-p38阻滞剂15 mg/kg,30 min后分别与丙泊酚低氧组、丙泊酚空气组、丙泊 酚氧气组、脂肪乳低氧组、脂肪乳空气组、脂肪乳氧气组进行同样处理。采用Western blot法检测海马组织磷酸化tau蛋白、总tau 蛋白、p-p38含量,水迷宫实验评估大鼠空间学习和记忆能力。结果丙泊酚低氧组、丙泊酚空气组与相应脂肪乳组相比p-p38、 磷酸化tau蛋白、总tau蛋白含量升高(P<0.05),丙泊酚氧气组、阻滞剂加丙泊酚空气组、阻滞剂加丙泊酚低氧组、阻滞剂加丙泊 酚氧气组与相应脂肪乳组相比各蛋白表达无差异(P>0.05)。丙泊酚低氧组、丙泊酚空气组、阻滞剂加丙泊酚空气组、阻滞剂加 丙泊酚低氧组与相应脂肪乳组相比潜伏期延长(P<0.05)、穿越平台次数减少、第三象限停留时间缩短(P<0.05);丙泊酚氧气 组、阻滞剂加丙泊酚氧气组与相应脂肪乳组相比水迷宫实验结果无差异。阻滞剂加丙泊酚氧气组与丙泊酚氧气组,阻滞剂加 丙泊酚低氧组与丙泊酚低氧组、阻滞剂加丙泊酚空气组与丙泊酚空气组之间水迷宫实验结果有差异(P<0.05);脂肪乳低氧组 与阻滞剂加脂肪乳低氧组、脂肪乳空气组与阻滞剂加脂肪乳空气组、脂肪乳氧气组与阻滞剂加脂肪乳氧气组之间水迷宫实验 结果无差异。结论丙泊酚合并低氧可通过p38 通路影响tau 蛋白表达从而损伤未成熟大鼠的认知功能,氧气在该过程中可 发挥一定的保护作用。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1294 759470 张敬,于晴,刘阳,刘辉,孙茫,田芹,涂生芬 分泌型卷曲相关蛋白4在不同DNA错配修复功能状态Ⅱ期肠癌中的表达及意义 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111300 目的探究分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)在DNA错配修复(MMR)功能正常与MMR功能缺陷的Ⅱ期结肠癌中的表达及 意义。方法收集新鲜的Ⅱ期结肠癌组织标本,并根据MMR 状态分为pMMR 和dMMR 组。利用Affymetrix Human oeLncRNA 基因芯片检测两组不同MMR状态结肠癌组织中差异表达的mRNA情况。通过q-PCR和Westernblot 技术检测 dMMR和pMMR肠癌组织、细胞株中SFRP4的表达并分析两组间表达差异情况;通过免疫组化技术检测增殖标志物Ki-67的表 达并分析SFRP4与Ki-67表达的相关关系。利用HCT116细胞株,干扰SFRP4的表达,通过流式细胞术检测干扰SFRP4前与干 扰后HCT116细胞株的凋亡率并分析其差异。结果PCR和Western blot的结果提示SFRP4在dMMR状态的肠癌组织、细胞株 中的表达明显高于pMMR的肠癌组织(P=0.014)、细胞株(P=0.0079),免疫组化结果提示SFRP4与Ki-67蛋白在肠癌组织的表 达呈负相关关系(P=0.041)。siRNA干扰SFRP4的表达后HCT116细胞株凋亡率下降,包括早期凋亡(P=0.003)和晚期凋亡率 (P=0.024)。结论SFRP4在dMMR型肠癌表达较pMMR型表达增高,促进肠癌细胞凋亡、抑制增殖,可能有助于改善MMR缺 陷型Ⅱ期肠癌预后。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1300 1005880 陈可绪,梁汉霖,彭杰文,郑燕芳 线粒体通透性转换孔在天麻素抗心肌细胞氧化应激损伤中的作用 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111306 目的探讨H9c2心肌细胞发生氧化应激损伤时,线粒体膜上的线粒体通透性转换孔(mPTP)在天麻素抗氧化应激损伤的 保护机制中所发挥的作用。方法本实验分为6组:正常组,过氧化氢组,天麻素+过氧化氢组,天麻素组,环孢菌素A组,环孢菌 素A+天麻素+过氧化氢组。通过加入环孢菌素A(mPTP开放剂)观察天麻素的保护作用是否被抑制。用MTT法初步检测各组 细胞存活率,采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪观察细胞早期凋亡率,大鼠三磷酸腺苷(ATP)试剂盒检测ATP的 含量,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)的含量,激光扫描共聚焦显微镜观察Jc-1标记的线粒体膜电位,Western blot 检测细胞内细胞色素C(Cyt C)含量,Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的酶活性。结果环孢菌素A+天麻素+过氧化氢 组线粒体的相对膜电位低于天麻素+过氧化氢组(1.98±0.18 vs 3.08±0.14),差异有统计学意义(P=0.014)。环孢菌素A可以阻断 氧化应激时天麻素降低细胞内活性氧和相关凋亡因子的含量、抑制相关因子活性的作用(P<0.05),并且在一定程度上阻断了天 麻素的抗凋亡作用(5.77±0.75)% vs(1.97±0.82)%,两者差异有统计学意义(P<0.001)。结论天麻素可以通过抑制心肌细胞发 生氧化应激损伤时mPTP的开放,最终通过减少凋亡来发挥一定的抗氧化应激损伤的作用。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1306 773025 韩学超,徐菁蔓,徐森,孙雅涵,何玛莉,李晓东,李心雨,皮佳仪,于睿,田炜 外周静脉-动脉血二氧化碳分压差可预测感染性休克患者预后:62例前瞻性研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111312 目的探讨早期复苏后外周静脉-动脉血二氧化碳分压差对感染性休克患者预后的预测价值。方法采用前瞻性研究方 法,选择2017年5月~2018年5月南京中医药大学附属中西医结合医院重症医学科收治的感染性休克患者,测定患者早期复苏 6 h后中心静脉、动脉及外周静脉血血气分析,记录患者中心静脉、动脉及外周静脉血二氧化碳分压(PCO2),计算患者外周静脉- 动脉血二氧化碳分压差(Ppv-aCO2)及中心静脉-动脉血二氧化碳分压差(Pcv-aCO2),根据患者28 d预后将患者分为存活组及死 亡组,采用Pearson相关性分析法分析Ppv-aCO2与Pcv-aCO2相关性,采用多因素Logistic分析筛选患者死亡的危险因素,并通过 受试者工作特征曲线(ROC)评价各项指标预测患者预后的价值。结果共入选62例感染性休克患者,28 d存活35例,死亡27 例。与存活组比较,死亡组患者急性生理与慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)(24.2±6.0 vs 20.5±4.9,P=0.011)及序贯器官衰竭的评 分(SOFA)(14.9±4.7 vs 12.2±4.5,P=0.027)明显升高。6 h复苏后死亡组患者Pcv-aCO2(5.5±1.6 vs 7.1±1.7,P<0.001),Ppv-aCO2 (7.1±1.8 vs 10.0±2.7,P<0.001),及动脉乳酸(Lac)(3.3±1.2 vs 4.2±1.3,P=0.003)明显高于存活组。Pearson相关性分析显示PpvaCO2 与Pcv-aCO2明显相关,r=0.897,R2=0.805,P<0.001。多因素Logistic回归分析显示Ppv-aCO2和Lac是感染性休克患者28 d 生存率的独立预后因素[(Ppv-aCO2:β=0.625,P=0.001,相对危险度(OR)=1.869,95%CI:1.311~2.664;Lac:β=0.584,P=0.041, OR=1.794,95%CI:1.024~3.415)]。ROC曲线分析显示,Ppv-aCO2、Pcv-aCO2和Lac对感染性休克患者预后均有预测价值,其中 Ppv-aCO2的ROC曲线下面积(AUC)最大,为0.814(95%CI:0.696~0.931,P<0.001),最佳临界值为9.05 mmHg时,预测患者28 d 死亡的敏感度为70.4%,特异度为88.6%;Lac的AUC=0.732(95%CI:0.607~0.858,P=0.002),最佳临界值为3.45 mmol/L 时,敏 感度为70.4%,特异度为74.3%;Pcv-aCO2的AUC=0.766(95%CI:0.642~0.891,P<0.001),最佳临界值为7.05 mmHg时,敏感 度为66.7%,特异度为80.0%。结论Ppv-aCO2与Pcv-aCO2相关,与感染性休克患者预后相关,可作为评估感染性休克患者28 d 生存率的独立预后指标。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1312 924877 高伟,张勇,倪海滨,张家留,周丹丹,殷丽萍,张丰,陈浩,张蓓蓓,李伟 二甲基苯并蒽诱导外阴鳞状上皮内病变大鼠模型的建立 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111318 目的建立SD大鼠外阴鳞状上皮内病变动物模型。方法采用二甲基苯并蒽(DMBA)丙酮溶液制备外阴鳞状上皮内病变 动物模型,将70只雌性SD大鼠分成空白对照组(10只)、机械刺激组(10只)、丙酮组(10只)、机械刺激+DMBA丙酮实验组(模 型组,40只);每周3次对各组SD大鼠外阴皮肤进行相应处理,实验处理14周,观察至18周。分别于6、8、10、12、14、18周在肉眼 及光镜下动态观察4组SD大鼠外阴皮肤变化情况;取空白对照组和模型组SD大鼠外阴皮肤,采用免疫组织化学染色及免疫印 迹法检测突变型p53(mtp53)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的相对表达量,qRT-PCR 检测mtp53和VEGF mRNA的表达情 况。结果空白对照组、机械刺激组及丙酮组大鼠各个时期形态学及组织病理学变化无明显差异。模型组SD大鼠在第14周 70%出现了低级别鳞状上皮内病变改变,27.5%出现高级别鳞状上皮内病变改变,造模成功率达97.5%;免疫组化和Western blotting 检测结果显示,与空白对照组相比,模型组mtp53 和VEGF蛋白均有明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。qRTPCR 结果显示,模型组大鼠外阴皮肤中mtp53和VEGF mRNA的表达均高于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结 论0.5% DMBA丙酮溶液联合单纯机械刺激可以诱导雌性SD大鼠建立外阴鳞状上皮内病变动物模型。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1318 789857 范艺巾,唐华均,刘瑶,李成志 SIRT1通过调控Snail表达参与食管癌EC-9706和Eca-109细胞的上皮间质转化 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111325 目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)诱导食管癌EC-9706和Eca-109细胞上皮间质转化(EMT)发生中的作用和机制。 方法转染3条化学合成SIRT1 siRNA入食管癌EC-9706和Eca-109细胞,以空白细胞和转染阴性对照siRNA细胞作为对照, real-time PCR和western blot 检测转染效果。Transwell 侵袭小室和划痕实验检测各组细胞的侵袭转移能力变化。Real-time PCR和Western blot检测各组细胞上皮间质转化相关分子E-cadherin和vimentin的表达变化,同时进一步检测E-cadherin转录 抑制因子Snail、twist1 和ZEB的表达变化。结果与空白组和阴性对照组细胞相比,转染SIRT1 siRNA1 和SIRT1 siRNA3 的 EC-9706和Eca-109细胞SIRT1 mRNA和蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。Transwell侵袭小室和划痕实验 结果显示转染SIRT1 siRNA1和SIRT1 siRNA3组EC-9706和Eca-109细胞穿膜细胞数和划痕愈合能力较空白组和阴性对照组 细胞下降,差异有统计学意义(P<0.05)。转染SIRT1 siRNA1和SIRT1 siRNA3组EC-9706和Eca-109细胞E-cadherin表达明显 升高,而vimentin 表达下降,与空白组和阴性对照组细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。转染SIRT1 siRNA1 和SIRT1 siRNA3组EC-9706细胞Snail表达下降,与空白组和阴性对照组细胞相比差异有统计学意义(P<0.01)。转染SIRT1 siRNA1和 SIRT1 siRNA3 组Eca-109 细胞Snail 和twist1 表达下降,与空白组和阴性对照组细胞相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 SIRT1有可能通过调控Snail表达诱导EMT发生从而在食管癌细胞侵袭转移中发挥作用。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1325 993688 吴宇翔,辛道,刘灿,王峰 四肢成像专用锥束CT方法的设计与优化 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111331 目的人体四肢成像具有重要的临床意义,目前国内在该方面的研究匮乏,本文针对四肢骨骼成像高分辨率的特殊需求, 创建一种四肢专用锥束CT(ECBCT)成像方法。方法基于三维X射线断层成像技术以及高分辨率X射线平板探测器技术,作 者进行了ECBCT成像过程的物理建模及几何建模,研究其几何校正及图像重建方法,并搭建了相应的硬件系统。实验中对笔 筒体模、IQ体模以及动物肢体样本进行扫描,以评估该成像方法的有效性及其硬件系统的稳定性。结果采用几何校正后的参 数进行重建的笔筒图像结构清楚,无混叠伪影产生;IQ体模重建图像中CT值分布均匀,同等条件下多次扫描重建图像的噪声功 率谱不具差异性;动物肢体重建图像分辨率高,骨组织显示清晰。结论ECBCT可用于人体四肢成像,此外,该技术对骨组织的 成像分辨率高,可为骨关节炎等骨科疾病的诊断提供重要的临床信息。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1331 885950 马昆,李明强,陶熙,曾栋,王永波,边兆英,韦子权,谌高峰,冯前进,马建华,黄静 PSB0739抑制精液来源的淀粉样纤维形成 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111338 目的探究PSB0739对精液来源的淀粉样纤维形成的抑制作用。方法440 μmol/L的PAP248-286多肽分别与不同浓度的 化合物孵育,在不同时间点分别取样,用刚果红染色法、透射电子显微镜法检测药物对淀粉样纤维形成的影响;通过病毒感染实 验分析在PSB0739作用下,精液淀粉样纤维促进病毒感染的能力;利用Zeta电势仪检测PSB0739对成熟的精液来源性淀粉样 纤维表面电荷的影响;MTT法检测PSB0739对Hela细胞的毒性作用,以评价磺酸类化合物PSB073的体外安全性;体外细胞病 毒感染实验检测PSB0739抗HIV-1的活性。结果PSB0739在体外能有效抑制精液淀粉样纤维的形成,在48 h内,220 μmol/L 的PSB0739能抑制440 μmol/L的PAP248-286形成淀粉样纤维SEVI;透射电子显微镜可以直接观察到220 μmol/L的PSB0739 就能有效抑制PAP248-286形成的淀粉样纤维;PSB0739能拮抗SEVI介导的增强病毒感染的作用;体外220 μmol/L的PSB0739 能逆转SEVI携带的正电荷,差异均有统计学意义(P<0.05)。浓度低于62.5 μmol/L时PSB0739对宫颈癌Hela细胞无明显毒性 作用,细胞存活率无统计学意义(P>0.05);PSB0739能直接抑制HIV的能力与浓度正相关,PSB0739具有抗HIV作用,其IC50为 21.77±5.15 μmol/L。结论PSB0739能抑制精液来源的淀粉样纤维的形成。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1338 813186 蓝燕,杨梓超,刘涵,程宏彦,刘叔文,谭穗懿 图像配准方式对宫颈癌后装自适应放射治疗图像配准精度的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111344 目的研究不同配准范围大小和不同图像质量对宫颈癌后装自适应放射治疗不同分次之间CT图像配准精度的影响,为临 床的应用提供指导。方法随机选取15例已完成三维后装放疗的宫颈癌患者,将患者的最后一次治疗计划CT图像(CT1)和第 一次治疗计划CT图像(CT2)导入Varian 公司的Velocity软件,分别以不同图像质量(保留施源器和去除施源器两种)和不同配 准范围[配准靶区(S组)/配准器官结构(M组)/配准体廓(L组)]进行图像配准,以靶区和危及器官相似性指数(DSC)来评价不同 配准方式的配准精度,并采用配对T检验比较不同配准方式的配准精度。结果使用Velocity软件基于CT阈值自动分割金属施 源器,CT值选择1700~1800 HU时分割的体积最接近真实体积值。去除施源器组中各器官结构的相似性指数DSC优于或等效 于保留施源器组,且直肠的DSC值得到明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。不同配准框大小之间比较,配准靶区组(S 组)的高危靶区体积(HRCTV)和低危靶区体积(IRCTV)的相似性指数最高,优于配准器官组(M组)和配准体廓组(L组),差异 具有统计学意义(P<0.05)。配准器官组(M组)有较好的靶区体积配准精度和最优的危及器官配准精度,膀胱和直肠的DSC值 明显优于其他两组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在宫颈癌后装自适应放疗中,使用Velocity软件对0.24 cc的金属施 源器进行自动分割时应选择CTHU=1700~1800 HU。对施源器进行自动分割并屏蔽可以提高图像质量,图像配准时建议选用 配准器官范围进行图像配准。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1344 671308 彭清河,彭应林,朱金汉,蔡明章,周凌宏 肺原位腺癌、微浸润腺癌及浸润性腺癌中淋巴管密度的变化及其调控因子 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111349 目的分析肺原位腺癌、微浸润腺癌及浸润性腺癌中肿瘤淋巴管密度的变化及其可能的调控因子。方法收集具有完整临 床病理资料的肺腺癌病例301例并分为原位腺癌(n=28,9.3%)、微浸润腺癌(n=86,28.6%)及浸润性腺癌(n=187,62.1%)3组。 应用D2-40免疫组化标记计数各组肺腺癌中淋巴管密度,同时检测MT1-MMP、VEGF-C蛋白表达水平。分析肺腺癌3种病理 类型病例中淋巴管密度的变化差异及其与MT1-MMP、VEGF-C蛋白表达、临床病理因子(特征)的关系。结果淋巴管密度在分 析肺原位腺癌、微浸润腺癌及浸润性腺癌组中的变化差异具有统计学意义(P=0.000);淋巴管密度与VEGF-C蛋白表达水平具 有相关性(r=0.917, P=0.009)。淋巴管密度与肿瘤大小(r=0.686, P=0.017)、淋巴结转移(r=0.739, P=0.000)及临床分期(r= 0.874, P=0.012)具有相关性。结论肿瘤淋巴管生成可能与肺腺癌进展过程和临床病理因子(特征)密切相关,VEGF-C可能是 促进肿瘤淋巴管生成的调控因子。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1349 941741 何萍,顾霞,曾欣,郑咏玫,林晓东 红细胞分布宽度可作为乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者短期死亡的独立预测因子 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111354 目的探讨红细胞分布宽度(RDW)在乙肝相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者短期死亡预测的应用价值,拟建立 MELD-RDW预测模型。方法回顾性收集我院245 名HBV-ACLF患者入院时临床症状及血常规、肝功能、肾功、凝血检验、 HBV-DNA等检验指标,通过单因素分析、二元Logistic 回归分析等方法检验HBV-ACLF 患者短期死亡的危险因素,建立 MELD-RDW预测模型,使用ROC曲线比较各个指标及建立的预测模型对于HBV-ACLF患者转归预测价值的准确性。结果 HBV-ACLF患者生存组的RDW(14.97±1.38),MELD评分(23.54±4.35)明显低于死亡组(17.05±2.92,28.95±5.99);多变量分析 中,RDW是HBV-ACLF患者短期死亡的独立危险因素(OR=1.840,95%CI:1.479~2.289,P<0.005);根据回归分析结果,建立 [logisticMELD-RDW]=-9.375+0.582×RDW-0.091×白蛋白-0.05×凝西酶原活动度+0.186×MELD预测模型,其ROC曲线下面积 为0.878,优于单独使用RDW(0.724)与终末期肝病模型(MELD)评分(0.780)的预测价值。结论RDW可作为HBV-ACLF患者 短期死亡的独立预测因子;与MELD评分相比,MELD-RDW模型对HBV-ACLF患者短期死亡预测价值更高。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1354 754985 秦娇,强丽,陈文,吴刚 miR-122-5p通过靶向NOP14抑制黑素瘤的细胞增殖 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111360 目的探讨在黑素瘤组织中miR-122-5p的表达情况,同时研究miR-122-5p对人黑素瘤细胞株SK-MEL-110和A375细胞 增殖、细胞周期及凋亡的调控效应。方法荧光定量PCR检测miR-122-5p在黑素瘤和色素痣组织中的表达;培养SK-MEL-110 和A375细胞,瞬时转染miR-122-5p inhibitor及阴性对照inhibitor后,荧光定量PCR检测miR-122-5p的表达,MTT及流式细胞 仪方法检测对细胞增殖、周期和凋亡的影响,荧光定量PCR和Western Blot法检测NOP14的mRNA和蛋白水平;应用双荧光素 酶基因报告法进一步验证NOP14是否为miR-122-5p的靶基因。结果miR-122-5p在人色素痣和黑素瘤组织中的相对表达量 分别为1.23±0.270和7.65±1.37。转染miR-122-5p inhibitor后,miR-122-5p在SK-MEL-110和A375细胞中的相对表达量分别 为0.21±0.08和0.17±0.05。miR-122-5p inhibitor可以显著抑制黑素瘤细胞株SK-MEL-110和A-375细胞的增殖能力,明显增加 G1期细胞的比例,但对SK-MEL-110和A-375细胞的凋亡没有明显影响。转染miR-122-5p inhibitor对NOP14 mRNA水平没 有明显的影响,但可以显著提高NOP14的蛋白水平表达。荧光素酶报告基因检测显示,共转染miR-122-5p mimics和野生型 psi-CHECK2-3′UTR质粒组相对荧光素酶活性为0.21±0.14,较NC和野生型psi-CHECK2-3′UTR质粒转染组(0.56±0.1)显著下 降(P<0.01)。结论miR-122-5p在黑素瘤组织中高表达,提示miR-122-5p可能参与黑素瘤的发生发展过程。miR-122-5p 可能 通过NOP14影响SK-MEL-110和A-375细胞的周期,进而抑制细胞的增殖。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1360 737291 李璟蓉,赵瑞,方锐华,王建琴 干扰ADAM17表达可降低人结肠癌细胞对西妥昔单抗耐药 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111366 目的研究ADAM17的表达与结肠癌SW480细胞对西妥昔单抗耐药相关性。方法通过Western blot法检测结肠癌细胞 系ADAM17的表达情况,筛选出高表达ADAM17的结肠癌细胞株做为目标细胞株;采用siRNA片段干扰结肠癌细胞ADAM17 的表达,Western blot验证干扰效果;100 μg/mL的西妥昔单抗处理细胞24 h后,FITC/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡情况; Transwell实验检测ADAM17不同表达状态下的结肠癌细胞的迁移能力;运用Western blot法,检测在ADAM17不同表达状态 下的结肠癌细胞EGFR、AKT的磷酸化水平。结果人结肠癌SW480 细胞株中ADAM17 表达较高(P<0.05)。siRNA-1 和 siRNA-2干扰片段可显著降低SW480株ADAM17表达(P<0.05)。ADAM17表达被干扰后的SW480细胞对西妥昔单抗敏感性 显著上升(P<0.05)。干扰ADAM17 表达后,在西妥昔单抗药物作用下SW480 细胞迁移能力显著降低(P<0.05)。干扰了 ADAM17 表达后,SW480 细胞实验组的p-EGFR、p-AKT较对照组组显著降低(P<0.001)。结论干扰ADAM17 表达可抑制 EGFR-AKT通路激活从而减少人结肠癌SW480细胞对西妥昔单抗耐药。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1366 769136 陈瀛,郑克鸿,陈泽涛,冯海湛,方威,黄宗海 针刺对气道重塑小鼠TGF-β1/Smads通路的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111372 目的探讨针刺对气道重塑小鼠肺组织TGF-β1/Smads信号通路的调控作用。方法将30只SPF 级小鼠随机分为空白组、 模型组、针刺组,10只/组。模型组、针刺组制作小鼠哮喘模型。针刺组自造模之日起第10天行针刺操作,穴取肺俞、大椎、足三 里(两侧),每次留针20 min,隔日针刺1 次,共治疗7次。并于最后1次针刺结束后24 h行1%卵蛋白雾化吸入3 d,最后1次激发 后24 h于不同浓度乙酰甲基氯化胆碱(Mch)吸入下通过无创体积描计器检测小鼠肺阻力,然后采用HE染色法观察小鼠肺组织 的病理变化,ELISA 检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清中TGF-β1的表达,Western blot对各组气道平滑肌中差异蛋白 进行检测。将针刺组分离提取气道平滑肌细胞,空白组加入PBS液,抑制组加入TGF-β1抑制剂(LY2157299)分别进行培养,然 后Western blot检测两组细胞type-I及Smads蛋白表达相对量。结果模型组小鼠气管痉挛明显,管腔狭窄,支气管黏膜增厚,部 分上皮细胞脱落,肺泡隔增厚,气道平滑肌明显增厚;针刺组较模型组有明显改善;不同浓度Mch 激发后模型组小鼠肺阻力最 高,较其它两组均差异有统计学意义(P<0.05)。且3组小鼠的肺阻力都随着Mch的浓度加大而增加。模型组血清中TGF-β1阳 性表达OD值较空白组增加(P<0.05);针刺组阳性表达低于模型组(P<0.05)。针刺组BALF 中TGF-β1 含量低于模型组(P< 0.05)高于空白组(P<0.05)。模型组气道平滑肌中α-SMA、TGF-β1 及Smads 蛋白表达相对量均高于针刺组及空白组(均P< 0.05),抑制组细胞中type-I及Smads蛋白表达相对量较空白组高(P>0.05)。结论针刺能通过抑制气道TGF-β1 的表达,下调 Smads及α-SMA的表达来抑制气道重塑,减轻哮喘气道炎性反应,且抑制TGF-β1后,type-I及Smads蛋白表达相对量较高,针刺 可以通过TGF-β1/Smads通路来控制哮喘进展,为临床上哮喘的治疗提供理论依据。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1372 855663 刘慧慧,刘嘉羿,彭美玉,黎玉辉,李春桥 联合应用肌醇和木樨草素可选择性抑制肺腺癌A549细胞的生长 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111378 目的研究肌醇(MI)和木樨草素(LUT)对人肺腺癌A549细胞的作用,并探讨其机制。方法不同浓度的肌醇和木樨草素 处理A549细胞24 h或48 h,MTT法检测细胞活性。10 mmol/L 肌醇和20 μmol/L 木樨草素单独或共同处理A549细胞和永生化 肺支气管上皮细胞Beas-2B 48 h,MTT法、平板克隆形成实验和划痕愈合实验分别检测肌醇和木樨草素对两种细胞活性、细胞 克隆形成和迁移的影响,Western blot法检测肌醇和木樨草素对A549细胞中相关蛋白质表达水平的影响。结果肌醇和木樨草 素均可抑制A549细胞的活性,且呈浓度依赖性。10 mmol/L 肌醇和20 μmol/L 木樨草素作用A549细胞48 h后,肌醇处理组、木 樨草素处理组和联合处理组A549细胞的活性分别是对照组的92%、83%和70%,平板克隆形成数分别是对照组的79%、73%和 43%,划痕愈合度分别为24.61%、13.08%和8.65%,对照组划痕愈合度为29.99%;同等剂量下的肌醇和木樨草素单独或共同处 理对Beas-2B细胞的活性、克隆形成和迁移没有明显的抑制作用。与对照组相比,肌醇处理组细胞中p-PDK1和p-Akt以及木樨 草素处理组细胞中p-PDK1的蛋白质表达明显减少(P<0.05),联合处理组下调的幅度更为明显(P<0.05)。结论肌醇和木樨草 素可选择性的抑制A549细胞的活性、克隆形成和迁移,合用时抑制作用更为明显,可能是通过下调p-PDK1和p-Akt的表达发 挥的作用。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1378 785412 王允,张玉媛,陈雪,洪运,吴征东 电针足三里穴对大鼠手术后T淋巴细胞免疫功能的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111384 目的研究电针足三里穴调节大鼠围术期细胞免疫功能的作用。方法选取42只SD大鼠,分为3组,空白组(6只)、模型组 (18只)、电针组(18只),模型组及电针组麻醉后行大腿切开并股骨离断术,电针组于麻醉前及手术后1 h,在双侧足三里穴予以 电针刺激15 min,空白组不予任何处理。模型组及电针组分别于术后6、24、72 h称重处死,取SD大鼠心室血,流式细胞仪检测 CD3、CD4、CD8的含量并计算CD4/CD8,ELISA检测IL-1、IL-6,并与空白组比较。结果模型组及电针组CD3在术后6、24 h较 空白组均明显下降,模型组在术后72 h较空白组仍低,电针组在术后72 h已恢复至空白组水平,在各相应时间点,模型组CD3水 平均明显低于电针组;模型组CD4在术后6、24 h较空白组明显下降,至术后72 h才基本恢复至空白组水平,电针组CD4在术后 6 h较空白组明显下降,但术后24 h已恢复至空白组水平,在术后24、72 h,模型组CD4水平均低于电针组;模型组及电针组CD8 在术后6、24、72 h 较空白组均无明显变化;模型组CD4/CD8 术后24、72 h 较空白组明显下降,电针组则无明显变化,术后24、 72 h,模型组及电针组CD4/CD8有明显差异,模型组低于电针组。模型组及电针组IL-1水平在术后6、24、72 h较空白组均明显 下降,在各相应时间点,模型组IL-1水平均明显低于电针组;模型组及电针组IL-6水平在术后6、24 h较空白组均明显升高,术后 72 h电针组已降低,模型组仍升高,在术后6、72 h模型组IL-6水平均明显高于电针组。结论电针组细胞免疫功能的抑制程度 明显较模型组轻,且恢复明显比模型组快,表明电针足三里穴对大鼠术后细胞免疫功能具有一定的保护作用,有利于术后恢复。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1384 612634 张建杏,王研,郭远波,纪雪霞,王晟 雷帕霉素在兔眼滤过性手术中的抗瘢痕作用 /oa/darticle.aspx?type=view&id=2018111389 目的探讨雷帕霉素在兔眼滤过性手术中抑制瘢痕的作用。方法取健康成年的青紫兰兔96只,雌雄不限,左眼行小梁切 除术后随机分为4组,3组对照组,1组实验组,每组24只。术后实验组左眼分别滴1%、3%、5%的雷帕霉素,对照组左眼滴药用 蓖麻油,4次/d。监测眼压并观察结膜、角膜、前房、晶状体情况。常规HE染色,免疫组化方法标记PCNA(抗增殖细胞核抗原) 观察滤过道成纤维细胞增殖情况。将RTFs进行体外培养,检测不同浓度(0、0.06、0.25、1、4mg/L)的雷帕霉素处理成纤维细胞后 caspase-3,caspase-8,caspase-9的表达变化。结果术后各实验组较对照组眼压低,各时间点实验组PCNA阳性细胞数低于对照 组,均具有显著性差异(P<0.05)。采用不同浓度的雷帕霉素处理后,caspase-3,caspase-9的mRNA表达量和蛋白的相对表达量 随着雷帕霉素浓度的增加而增加(P<0.001),表现出浓度依赖性。但是caspase-8的mRNA表达量和蛋白相对表达量与对照组 相比却未表现出显著的差别(P>0.05)。结论雷帕霉素具有抑制兔青光眼滤过术后滤过道中成纤维细胞过分增生,减少瘢痕形 成的作用,还可以通过增加caspase-3和caspase-9的表达诱导RTFs细胞凋亡的发生。 2018年11月30 00:00 2018年11期 1389 711848 康欣,申颖,赵海霞,王召格,关文英,葛瑞春,王瑞芳,邰雪