南方医科大学学报 /oa 沉默CIT基因可抑制前列腺癌细胞的增殖和转移 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903257 目的探究Citron Rho-interacting serine/threonine kinase(CIT)基因在前列腺癌中的表达特点,并探讨CIT基因对PC-3细 胞增殖、迁移和侵袭能力的调控作用及其可能的分子机制。方法利用TCGA和MSKCC数据库分析CIT在前列腺癌组织的表 达水平和临床相关性。采用siRNA干扰CIT的表达,采用CCK-8、划痕实验和Transwell实验检测CIT对前列腺癌PC-3细胞系 的增殖、迁移和侵袭特性的影响。采用Western blotting检测CIT对上皮-间质转化和Hippo-YAP通路的调控作用。结果TCGA 数据库分析表明,CIT在前列腺癌组织中表达显著上调(P<0.05);MSKCC数据库分析表明,CIT表达水平与N分期(P<0.05)、M 分期(P<0.001)、Gleason评分(P=0.010)和PSA水平(P=0.004)成正相关关系。PC-3细胞中沉默CIT表达可显著抑制细胞的增 殖、迁移和侵袭,逆转上皮-间质转化进程,并抑制Hippo-YAP通路的激活。结论CIT基因可能是前列腺癌的致病基因,其分子 机制可能与Hippo-YAP通路的激活有关。 2019年04月11 00:00 2019年03期 257 783813 陈海平,向玘,刘大伟,魏强 肿瘤相关巨噬细胞通过诱导肝癌细胞自噬降低索拉菲尼的促凋亡作用 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903264 目的探讨索拉菲尼治疗肝癌耐药的分子机制,寻找逆转耐药新靶点。方法体外诱导THP-1细胞建立M2型肿瘤相关巨 噬细胞(TAMs),免疫荧光鉴定M2型TAMs,将SMMC-7721细胞分为空白对照组、M2-TAMs共培养组、索拉菲尼组以及索拉菲 尼与M2-TAMs共培养联合处理组,CCK-8法检测M2-TAMs对索拉菲尼抑制SMMC-7721增殖的影响;Annexin V/PI双染法、 蛋白质免疫印迹法检测使用自噬抑制剂氯喹处理前后M2-TAMs对索拉菲尼促SMMC-7721细胞增殖、细胞凋亡的影响及细胞 凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白的表达量变化。结果索拉菲尼对肝癌细胞SMMC-7721作用48 h的IC50为2.25 μmol/L,索拉菲 尼对与M2-TAMs共培养(共培养给药组)48 h 的SMMC-7721的IC50为4.72 μmol/L。共培养给药组与单独给药组相比细胞凋亡 率明显下降(P<0.01),Bcl-2 表达明显增加,Bcl-2/Bax 比值增加(P<0.05),而自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值升高(P< 0.001),p62蛋白表达下调(P<0.05),自噬水平明显增强。氯喹处理后能明显抑制共培养给药组的细胞增殖(P<0.05),促进细胞 凋亡(P<0.05),下调Bcl-2/Bax比值(P<0.01)。结论M2-TAMs可通过促进SMMC-7721细胞自噬,降低索拉菲尼对肝癌细胞的 增殖抑制作用,因此抑制自噬可能是逆转肿瘤微环境诱导索拉菲尼治疗耐药的新靶点。 2019年04月11 00:00 2019年03期 264 967185 魏芳,宗世烨,周静,樊敏,王颖,程秀,刘浩 中国城镇居民亚健康评定量表的常模构建 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903271 目的建立中国城镇居民亚健康评定量表(SHMS V1.0)的常模。方法采用多阶段分层抽样方法,选取全国六个地区,包 括华北地区的天津市、华南地区的广东省、中南地区的安徽省、西南地区的四川省、西北地区的兰州市和东北地区的哈尔滨市共 15 066名城镇居民进行亚健康状况的流行病学调查。在分析中国城镇居民SHMS V1.0评分特点的基础上建立均数常模、百分 位常模和划界常模。结果分性别和年龄组(14~19岁,20~29岁,30~49岁,50~64岁和≥65岁)建立了中国城镇居民亚健康评定 量表总分及生理亚健康、心理亚健康和社会亚健康子量表得分的均数常模、百分位常模,并分别以x±S和x±0.5 S为界将中国城 镇居民的健康状况按亚健康评定量表总分从低到高依次划为疾病、重度亚健康、中度亚健康、轻度亚健康和健康5种状态。结 论构建了中国城镇居民亚健康评定量表常模,为中国城镇居民亚健康状态的快速筛查和诊断提供参考依据,也为进一步探讨 亚健康现患率及其影响因素奠定了理论基础。 2019年04月11 00:00 2019年03期 271 552739 许军,薛允莲,刘贵浩,冯叶芳,许梦瑶,谢娟,王晓辉,陈孝谋,蒋丽洁 碱性调宁蛋白在系统性硬化症中的表达及作用 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903279 目的研究碱性调宁蛋白(CNN1)在系统性硬化症(SSc)中的表达及其对成纤维细胞的作用。方法收集SSc患者皮肤活 检组织19例,正常人的皮肤活检组织21例。通过Real-time PCR方法检测皮肤组织中CNN1和α-SMA的基因表达;通过免疫组 化方法检测皮肤组织中CNN1的蛋白表达;利用RNA干扰方法降低成纤维细胞中CNN1的基因表达,通过Real-time PCR检测 细胞中CNN1及纤维化相关基因α-SMA、CTGF、COL1A1、COL1A2、COL3A1的mRNA相对表达量;应用细胞实时增殖检测系统 (xCELLigence系统)检测细胞增殖。结果与正常对照相比,SSc患者皮肤组织中CNN1的表达水平显著升高(P<0.05);皮肤组 织中,CNN1 的表达和α-SMA存在正相关,具有统计学意义(r=0.7219,P<0.0001);与正常对照组相比,SSc 患者皮肤组织中 CNN1的蛋白表达升高;原代皮肤成纤维细胞中,CNN1的表达和α-SMA、COL1A1均存在正相关,具有统计学意义(r=0.6547,P< 0.05;r=0.6438,P<0.05);同时,原代皮肤成纤维细胞中干扰CNN1 后,可显著抑制细胞增殖,降低纤维化相关基因(CTGF、 COL1A2 等)表达,降低胶原蛋白的表达。结论CNN1 在SSc 患者中表达升高,且干扰CNN1 可降低成纤维细胞活性,提示 CNN1与SSc纤维化密切相关。 2019年04月11 00:00 2019年03期 279 738654 赵晗,杨凯,刘庆梅,胡京晗,吴文育,王久存 沉默YAP1 可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903286 目的探究沉默Yes 相关蛋白1(YAP1)对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR和 Western blot方法检测YAP1在鼻咽癌细胞系中的表达水平;在鼻咽癌细胞S26和S18中转染3条合成的小干扰RNA:si-NC, si- YAP1#1和si-YAP1#2,以转染阴性对照si-NC的细胞作为对照组,转染si-YAP1#1和si-YAP1#2的细胞作为实验组,实时荧光定 量PCR和Western blot检测转染后的干扰效率;通过细胞计数、平板克隆形成等方法评估转染si-YAP1#1和si-YAP1#2后的实验 组和转染si-NC的对照组对鼻咽癌细胞增殖能力的影响;用划痕和Transwell 方法分析各组细胞迁移与侵袭能力的变化; Western blot检测各组细胞中c-myc、上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)等与细 胞增殖和上皮间质转化相关蛋白的表达变化。结果YAP1在鼻咽癌细胞系中高表达;与阴性对照组相比,转染si-YAP1#1和si- YAP1#2的实验组细胞中YAP1的mRNA及蛋白水平均显著降低(P<0.05);生长计数、平板克隆、划痕及Transwell等实验结果 均显示转染si-YAP1#1和si-YAP1#2的实验组细胞的生长和克隆能力、划痕愈合能力及侵袭能力较阴性对照组细胞明显下降 (P<0.01);且相较阴性对照组,实验组细胞中c-myc、N-cadherin和Vimentin等蛋白的表达水平降低,E-cadherin的表达量增加。 结论YAP1在鼻咽癌细胞系中高表达,在鼻咽癌细胞中利用siRNA靶向敲低YAP1的表达后可以抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移 及侵袭能力,提示YAP1可以作为一个潜在的鼻咽癌临床治疗干预靶点。 2019年04月11 00:00 2019年03期 286 941724 周雅青,杨蓉,马刚 右美托咪定可减轻大鼠胫骨骨折手术所致的术后认知功能障碍 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903292 目的研究右美托咪定对大鼠胫骨骨折手术所致术后认知功能障碍的影响。方法第1阶段:选择16只雄性SD大鼠,随机 分为对照组和胫骨骨折组,于胫骨骨折手术造模后1、3、5、7 d分别测定两组大鼠行为学指标及海马区CX3CL1蛋白及CX3CL1 mRNA的表达变化。第2阶段:选择24只雄性SD大鼠,随机分为对照组、胫骨骨折组和胫骨骨折+CX3CL1中和抗体组。分别 测定各组大鼠行为学指标及海马区CX3CL1蛋白的表达变化。第3阶段:选择24只雄性SD大鼠,随机分为对照组、胫骨骨折组 及胫骨骨折+Dex组。分别测定各组大鼠行为学指标及海马区CX3CL1蛋白和CX3CL1mRNA的表达变化。结果造模后1、3、 5、7 d,胫骨骨折组大鼠的新异臂探索时间明显低于对照组(P<0.05);胫骨骨折组大鼠海马区CX3CL1蛋白和CX3CL1 mRNA 的表达明显低于对照组(P<0.05);胫骨骨折+CX3CL1 中和抗体组大鼠新异臂探索时间明显低于胫骨骨折组;胫骨骨折+ CX3CL1中和抗体组大鼠海马区CX3CL1蛋白的表达明显低于胫骨骨折组;Dex组大鼠新异臂探索时间明显长于胫骨骨折组 (P<0.05);Dex组大鼠海马区CX3CL1蛋白及CX3CL1 mRNA的表达明显高于胫骨骨折组(P<0.05)。结论Dex可以通过提高 CX3CL1的表达减轻大鼠胫骨骨折手术所致的术后认知功能障碍。 2019年04月11 00:00 2019年03期 292 613304 张津玮,张小宝,钱海涛,崔吉正,顾小萍 地尔硫卓上调异黏蛋白在肝癌细胞中的表达 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903298 目的研究钙离子通道抑制剂逆转肝癌细胞多药耐药和对异黏蛋白表达的影响及分子机制。方法采用不同浓度钙离子 抑制剂(0、25、50、100、200、400 μmol/L)干预肝癌MHCC97H、7402细胞不同时间(12、24、48 h)后,用体外细胞划痕实验检测处 理后肝癌细胞运动迁徙能力;采用RT-PCR和免疫细胞化学技术检测钙离子抑制剂对肝癌细胞中P-gp和异黏蛋白的表达的影 响。结果钙离子抑制剂能够一过性抑制肝癌MHCC97H、7402 细胞的迁徙运动能力,且具有一定的时间和浓度依赖性特点 (P<0.05)。同时,不同浓度钙离子抑制剂盐酸地尔硫卓均能一过性上调肝癌MHCC97H、7402细胞中异黏蛋白mRNA和蛋白的 表达(P<0.05),但并不抑制P-gp蛋白的表达。结论钙离子抑制剂地尔硫卓能一过性抑制MHCC97H、7402肝癌细胞的迁徙运 动,并能反馈性上调促癌基因异黏蛋白mRNA和蛋白的表达水平。因而,采用钙离子抑制剂很可能具有增加肿瘤进展的潜在风险。 2019年04月11 00:00 2019年03期 298 769644 郭睿,金雪媛,田怡,黄小钟,李宗芳,杨军 沉默RRM1 可逆转乳腺癌细胞MCF-7/R对紫杉醇的耐药性 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903304 目的阐明沉默核苷酸还原酶M1亚基(RRM1)对乳腺癌耐药细胞MCF-7/R逆转耐药的作用。方法通过高浓度紫杉醇诱 导耐药株MCF-7/R;运用Kaplan-Meier Plotter绘制RRM1基因的生存曲线;通过siRNA沉默MCF-7/R细胞中RRM1基因表达, 并用Western blot 和qRT-PCR方法检测蛋白和基因水平的表达,筛选出高效特异的si-RRM1 序列;将该si-RRM1 序列转染 MCF-7/R细胞,筛选得到能稳定抑制RRM1基因表达的细胞株MCF-7/R/siRNA;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和5-乙炔基-2’脱氧 尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测RRM1沉默后MCF-7/R细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡,并观察周期、凋 亡相关蛋白的变化;构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察沉默RRM1后给予紫杉醇治疗对裸鼠体内抑瘤效果的影响。结果生存曲 线分析显示RRM1基因表达与乳腺癌患者的生存率呈负相关(P=0.000);MCF-7/R细胞中证实RRM1蛋白和mRNA表达水平 较MCF-7细胞均显著升高(P<0.01);si-RRM1序列筛选中,转染si-RRM1-04组细胞的RRM1蛋白和mRNA表达量降低最为显 著(P<0.001);沉默RRM1后,MCF-7/R细胞对紫杉醇的敏感性显著增加,细胞晚期凋亡比例明显升高(P<0.001),同时降低Akt 蛋白的磷酸化并抑制凋亡蛋白Bcl-2 的表达,促进p53 蛋白表达水平的增加(P<0.001);裸鼠实验显示,与si-NC组相比,沉默 RRM1后给予紫杉醇治疗可显著抑制裸鼠体内肿瘤的生长(P<0.001)。结论沉默RRM1可通过诱导细胞凋亡增加提高MCF- 7/R细胞化疗敏感性,逆转乳腺癌紫杉醇化疗耐药。 2019年04月11 00:00 2019年03期 304 899748 田楠楠,周磊,杨丹妮,吴焕贤,马韵词,吕琳,吴少瑜 Tristetraprolin通过NF-?B 通路抑制肺腺癌细胞自噬 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903313 目的研究RNA结合蛋白tristetraprolin在肺腺癌中的表达及抑制自噬作用的分子机制。方法瞬时转染tristetraprolin过 表达质粒,分别在转染tristetraprolin 24、48 及72 h 后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot 检测肺腺癌细胞中 tristetraprolin表达及自噬相关分子Beclin1、LC3II/LCI及p62的表达变化。瞬时转染tristetraprolin过表达质粒及加入TNF-α,将 肺腺癌细胞分为空载组、tristetraprolin 组、空载+TNF-α组及tristetraprolin+TNF-α组,应用免疫荧光和Western blot检测NF-ĸB p65、c-rel、p50分子在细胞核中表达情况。共转染tristetraprolin过表达质粒及IκBα-mut质粒,将肺腺癌细胞分为tristetraprolin 空载组、IκBα-mut 空载组、tristetraprolin 组、IκBα-mut 组及tristetraprolin+IκBα-mut 组,采用RT-qPCR 和Western blot 检测 tristetraprolin表达及自噬相关基因表达变化。结果Tristetraprolin在肺腺癌细胞中RNA及蛋白水平表达低(P<0.001)。过表达 tristetraprolin 后,自噬相关基因Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在RNA及蛋白水平表达均较空载组降低(P<0.001)。同时,过表达 tristetraprolin后,细胞核内的p65及c-rel蛋白表达较空载组及空载+TNF-α组减少(P<0.05),但p50表达无明显变化(P>0.05)。 过表达tristetraprolin后,p65及c-rel核移位较空载组减少。共转染IκBα突变质粒及tristetraprolin过表达质粒后,NF-κB信号通 路被阻断,自噬相关基因Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在RNA及蛋白水平表达较tristetraprolin过表达组升高(P<0.05),NF-ĸB信号 通路被阻断后tristetraprolin对自噬的抑制作用减弱。结论Tristetraprolin在肺腺癌细胞中低表达,过表达tristetraprolin可能通 过抑制NF-ĸB p65及c-rel核移位而抑制肺腺癌细胞自噬。 2019年04月11 00:00 2019年03期 313 980071 邓小垭,罗勤利,董飞,徐莉,唐小葵 利用CRISPR/Cas9 技术构建敲除G6PD基因c.392G>T(p.131G>V)突变位点的HEK293T稳定细胞株 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903320 目的利用CRISPR/Cas9技术构建敲除G6PD基因常见突变位点——c.392G>T(p.131G>V)突变位点的HEK293T细胞, 为后期研究其基因修复提供可靠的细胞模型。方法针对G6PD基因c.392G>T(p.131G>V)突变位点靶向设计4对向导RNA (sgRNA),构建表达Cas9-sgRNA的外源PX458质粒,将其转染至HEK293T细胞内,通过流式细胞术分选表达GFP荧光蛋白的 细胞进行培养,利用T7核酸内切酶1(T7E1)酶切验证CRISPR/Cas9的剪切效率,有限稀释法筛选单克隆细胞,测序鉴定并检测 G6PD mRNA、蛋白表达和细胞功能的改变。结果成功构建基于G6PD基因c.392G>T(p.131G>V)突变位点的Cas9-sgRNA外 源PX458 质粒,T7E1 酶切检测四对sgRNA 的编辑效率分别为6.74%、12.36%、12.54%、2.94%。测序鉴定敲除G6PD 基因 c.392G>T(p.131G>V)突变位点的细胞株构建成功,细胞G6PDmRNA、蛋白表达和G6PD酶活性降低,细胞增殖能力下降,维生 素K3诱导细胞死亡增加。结论本研究成功构建敲除G6PD基因c.392G>T(p.131G>V)突变位点的HEK293T稳定细胞模型, 为后期研究基因的修复奠定了基础。 2019年04月11 00:00 2019年03期 320 1230917 周燕霞,胡韦维,张虹洋,邹琳,张鹏辉 CYP2D6*10 对冠心病患者美托洛尔谷浓度和血压心率的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903328 目的探讨CYP2D6 *10(c.100 C>T)对冠心病患者血浆中美托洛尔及代谢物α-羟化美托洛尔谷浓度和血压心率的影响。 方法将患者分成服用美托洛尔片(n=128)和美托洛尔缓释片(n=126)两组,用Taqman 实时荧光定量PCR对CYP2D6*10进行 基因分型,UPLC-MS/MS测定美托洛尔和α-羟化美托洛尔的谷浓度,分别比较两组患者中不同CYP2D6*10基因型患者的美托 洛尔和α-羟化美托洛尔的剂量校正浓度(C/D)的差异。记录患者美托洛尔达稳态时的静息血压和心率,比较两组患者中不同基 因型患者之间血压和心率的差异。结果服用美托洛尔缓释片的患者中,α-羟化美托洛尔谷浓度与收缩压相关(P=0.0204)。 CYP2D6*10慢代谢型对两组患者的美托洛尔和α-羟化美托洛尔浓度均有显著影响(P<0.01),两组患者中TT型较CC型和CT 型患者美托洛尔C/D高(均P<0.01);与CT型相比,TT型患者α-羟化美托洛尔C/D较低(P<0.01)。服用美托洛尔缓释片的患者 中,与CC型相比,CT型(P=0.0281)和TT型(P=0.0196)患者舒张压较低,而两组患者中不同基因型患者之间收缩压和心率均无 统计学差异。结论CYP2D6*10T等位基因突变可使冠心病患者美托洛尔代谢减慢,血浆中美托洛尔浓度增加而α-羟化美托洛 尔浓度和舒张压降低,CYP2D6*10对患者美托洛尔达稳态时的静息收缩压和心率无显著影响。 2019年04月11 00:00 2019年03期 328 700619 朱茜,赖伟华,黎励文,李汉平,钟诗龙 HPLC-MS/MS同时检测大鼠血浆中阿托伐他汀和伏立康唑的浓度 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903337 目的建立并应用同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀和伏立康唑浓度的液相质谱联用方法(HPLC-MS/MS),研究阿托伐他 汀单独给药及与伏立康唑联合给药后,大鼠体内阿托伐他汀的药动学变化以及伏立康唑的浓度变化。方法采用醋酸钠酸化, 甲基叔丁基醚液-液萃取法处理血浆样品,经Thermo Hypersil Gold C1(8 2.1×100 mm, 1.9 μm)色谱柱分离,流动相为乙腈-0.1%甲 酸水溶液,梯度洗脱,分析时间6 min;质谱检测采用加热电喷雾离子源(H-ESI)正离子扫描方式,选择反应监测(SRM)模式检 测,选用m/z559.2→440.2(阿托伐他汀)、m/z350.2→281(伏立康唑)、m/z370.2→252(内标兰索拉唑)作为定量分析的离子。结 果阿托伐他汀在0.01~100 ng/mL(r=0.9957),伏立康唑在0.025~100 ng/mL(r=0.9966)范围内线性关系良好,阿托伐他汀和伏 立康唑的日间和日内精密度均小于13%,提取回收率66.50%~82.67%,血浆样品稳定性符合测定要求。单独给药和联合给药后 大鼠血浆中阿托伐他汀的AUC0-24 h分别为(438.78±139.61)和(927.43±204.12))h·μg·L-1,CLz/F分别为(23.89±8.14)和(10.43± 2.58)L·h-1·kg-1,Cmax分别为(149.62±131.10)和(159.37±36.83)μg·L-1,t1/2分别为(5.08±1.63)和(5.58±2.11)h,Tmax分别为(0.37± 0.14)和(3.60±1.52)h,其中AUC0-24 h和CLz/F,Tmax具有显著性差异(P<0.05)。同时可测定合并给药组中伏立康唑的血药浓度。 结论本方法简单快速,灵敏度高,可用于同时检测大鼠血浆中阿托伐他汀和伏立康唑的浓度。伏立康唑和阿托伐他汀联用,使 阿托伐他汀的部分药代动力学参数发生了改变。 2019年04月11 00:00 2019年03期 337 847245 吕斌,寻添荣,吴树龙,占霞,荣艳,张庆,杨西晓 大肠杆菌O157:H7 体内多聚磷酸盐的DAPI荧光定量检测 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903344 目的应用荧光剂DAPI探索一种直接定量大肠杆菌O157:H7无机多聚磷酸盐(polyP)的可靠方法。方法提取并纯化大 肠杆菌O157:H7 野生株DNA,DAPI与DNA、polyP45结合,测定360 nm和415 nm激发光的发射光谱;应用共聚焦显微镜,观察 细菌DAPI-DNA和DAPI-polyP复合物荧光,验证DAPI检测polyP的可行性;细菌液氮速冻溶解、-80 ℃速冻溶解、-20 ℃速冻溶 解、60 ℃加热10 min、Triton x-100作用、室温下放置后倍比稀释涂平板,观察6种方法对细菌存活的影响;与DAPI作用后,测定 荧光值,确定细胞膜通透性的最佳前处理方法;建立标准曲线,测定EHEC野生株、ppk1 两个突变株polyP 含量。结果应用 360 nm 激发波长,DAPI-DNA最大发射波长为460 nm;应用415 nm 激发波长,DAPI-polyP 最大发射波长为550 nm;应用 405 nm激发光,收集DAPI-DNA蓝色荧光(425~475 nm),应用488 nm激发光,收集DAPI-polyP绿色荧光(500~560 nm);最佳 细菌前处理方法为-80 ℃速冻后室温下自然溶解;标准曲线为Y=1849X+127.5(R2=0.991),测定各株菌polyP量,其中野生株显 著高于ppk1缺失突变株。结论DAPI荧光定量检测方法具有直接、可靠、易于操作、定量检测等特点,可为进一步研究polyP在 肠出血型大肠埃希菌O157:H7中的作用提供技术支持。 2019年04月11 00:00 2019年03期 344 819060 杜艳丽,韩宗利,王湘雨,万成松 巴西苏木素对舌癌Tca8113 细胞凋亡和自噬的影响及分子机制 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903351 目的探讨巴西苏木素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其分子机制,为临床用药提供理论依 据。方法用MTT法检测巴西苏木素对Tca8113细胞的增殖作用;Hoechst33342染色法观察细胞形态变化;Annexin V/PI双染 色检测巴西苏木素对Tca8113细胞凋亡程度的影响;Western blot法检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2、cleaved caspase3及自噬相关 蛋白p-AMPK、p-mTOR、LC3B、p62 的表达;使用AMPK通路抑制剂与巴西苏木素共同作用于Tca8113 细胞,并检测通路相 关蛋白p-AMPK、p-mTOR、LC3B的表达。结果MTT结果表明,巴西苏木素能明显抑制Tca8113 细胞的增殖,24 h 时IC50为 31.17 μmol/L;Hoechst33342染色结果显示,巴西苏木素能使Tca8113细胞发生凋亡形态学改变,且与浓度正相关;Annexin V/PI 染色结果显示,不同浓度巴西苏木素作用24 h后,细胞凋亡数和凋亡率均高于空白对照组;Western blot检测相关蛋白表达结果 表明,巴西苏木素可抑制抗凋亡蛋白bcl-2,促进凋亡关键蛋白bax和cleaved-caspase3的表达,同时增加LC3B和p-AMPK的表 达,降低p62和p-mTOR表达。在与抑制剂合用后,p-AMPK与LC3B表达量虽仍略高于空白对照组,但与单纯使用巴西苏木素 相比均明显降低,而p-mTOR的表达较巴西苏木素组则明显升高(P<0.05)。结论巴西苏木素能抑制Tca8113细胞增殖并促进 其凋亡,同时可通过AMPK/mTOR通路诱导细胞发生自噬。 2019年04月11 00:00 2019年03期 351 796061 贾亚萌,佟晓哲,范敬炎 长片段非编码RNA XIST可改变人鼻咽癌HNE1 细胞对顺铂的耐药性 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903357 目的明确长片段非编码RNA(lncRNA)X失活特异性转录本(XIST)对人鼻咽癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及可能的 机制。方法通过荧光定量PCR检测人鼻咽癌顺铂耐药HNE1细胞株(HNE1/DDP)中XIST的表达特征。采用MTT试验观察 XIST上调和下调对HNE1/DDP细胞DDP耐药性的影响,并通过EdU试验和流式细胞技术观察其对HNE1/DDP细胞增殖和凋 亡的影响。采用蛋白质印迹法检测XIST上调和下调对促凋亡因子程序性细胞死亡4(PDCD4)和Fas配体(Fas-L)蛋白表达的 影响。结果XIST在HNE1/DDP细胞的表达量显著高于HNE1细胞(0.57±0.06 vs 0.1±0.02,P<0.05)。下调XIST的表达显著降 低HNE1/DDP 细胞对DDP 的耐药性(P<0.05),而上调XIST 增加对DDP 的耐药性(P<0.05)。下调XIST 的表达显著降低 HNE1/DDP细胞增殖(6.17±1.93 vs 16.59 4.86, P<0.05)并诱导细胞凋亡[(18.04±4.72)% vs(4.22±1.65)%, P<0.05],而上调XIST 增加细胞增殖(25.40±7.21 vs 13.16±3.95, P<0.05)并抑制细胞凋亡[(2.82±0.88)% vs(6.46±1.75)%, P<0.05]。下调XIST的表达 显著增加HNE1/DDP细胞中PDCD4(4.10±0.42 vs 1.0±0.12, P<0.05和Fas-L(3.07 0.29 vs 1.0±0.14, P<0.05)蛋白的表达,而上调 XIST降低PDCD4(0.36±0.11 vs 1.0±0.18, P<0.05)和Fas-L(0.17±0.09 vs 1.0±0.21, P<0.05)蛋白的表达。结论XIST在HNE1/ DDP细胞中表达升高,下调和上调XIST的表达可分别降低和增加HNE1/DDP细胞对DDP的耐药性,其机制可能与PDCD4和 Fas-L蛋白表达改变相关。 2019年04月11 00:00 2019年03期 357 956579 王浩,李维,谭国林 T315I 基因突变的慢性髓性白血病临床特征及泊那替尼疗效 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903364 目的分析伴T315I突变的慢性髓系白血病(CML)的临床特征及不同治疗方法的疗效。方法回顾性分析19例行BCRABL KD突变检测T315I突变的CML患者的临床资料及不同治疗的预后,通过直接测序分析获得用于RTQ-PCR样品的BCRABL KD突变。用Sanger测序法对BCR-ABL KD突变进行测序。复发标准包括血液学复发、细胞遗传学复发和分子生物学复 发。结果19例CML-T315I患者,初诊时73.7%(14/19例)患者处于慢性期(CP),Sokal评分中高危患者占81.2%(13/16例)。19 例患者初诊后均行酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗,病程中78.9%(15/19例)患者有附加染色体畸变,52.6%(10/19例)患者存在多 重突变。68.4%(13/19 例)的患者在疾病进展后(加速期/急变期)检测出T315I 突变,从初诊到检测出T315I 突变的中位期为 40 m(5~120 m)。突变后12例行泊那替尼治疗(A组),7例选择传统化疗方案(B组)。A、B两组3年总生存率分别是83.3%和 14.2%(P=0.001)。结论小样本回顾性研究发现对TKI耐药的CML患者易检出T315I 突变,进展期检出率明显高于慢性期。 此类患者往往合并附加染色体和多重基因突变,预后较差,即行异基因造血干细胞移植,复发率仍较高。泊纳替尼长期维持治 疗,可能会改善预后,延长生存期。 2019年04月11 00:00 2019年03期 364 519834 陈晨,许娜,江雪杰,吴婉儿,周璇,刘靓,黄继贤,阴常欣,曹睿,廖立斌,徐丹,张宇明,刘启发,刘晓力 低剂量舒芬太尼联合腹横肌平面阻滞术后镇痛可加速腹腔镜全子宫切除患者的康复 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903369 目的探讨有利于腹腔镜全子宫切除术患者快速康复的镇痛措施。方法选择2016年9月~2017年8月广东省人民医院收 治的腹腔镜全子宫切除术患者60例,ASA Ⅰ~Ⅱ级,年龄25~55岁,随机分为两组,每组30例。A组为舒芬太尼1 μg/kg+甲磺酸 托烷司琼9.96 mg+凯纷200 mg+0.9%氯化钠溶液稀释至100 mL联合超声引导双侧脐平面腹横肌平面(TAP)阻滞;B组为舒芬 太尼2 μg/kg+甲磺酸托烷司琼9.96 mg+凯纷200 mg+0.9%氯化钠溶液稀释至100 mL,维持速度均为2 mL/h。采用视觉模拟评 分法(VAS评分)评估术后15 min、4、8、12、24、48 h疼痛程度,记录术后首次下床时间、术后住院时间和恶心呕吐发生率。结果 与B组相比,A组患者术后15 min、4、8、12 h VAS评分均降低,差异有统计学意义(P<0.01)。同时,与B组相比,A组患者术后首 次下床时间和住院时间也显著缩短,差异有统计学意义(P<0.01)。A组2例患者术后出现轻度恶心、呕吐反应,发生率6.67%。 B组6例患者术后出现恶心、呕吐反应,发生率20.00%。其中4例患者轻度恶心呕吐,2例患者中度恶心呕吐。结论1 μg/kg舒 芬太尼联合TAP阻滞在腹腔镜全子宫切除术后镇痛效果可靠,同时降低恶心、呕吐发生率,缩短术后首次下床时间和住院时间, 有利于加速患者快速康复。 2019年04月11 00:00 2019年03期 369 732098 纪雪霞,周国斌,王庆,孙强,马珏,王晟 颈部CT三维重建与超声评估残留甲状腺体积的准确性比较 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903373 目的对比研究颈部CT三维重建与超声在评估残留甲状腺体积中的准确性。方法回顾性分析17例(共21个残留甲状腺 腺叶)2017年2月~2018年3月于我院普通外科行残留甲状腺腺叶切除术患者的临床资料,分别对比患者术前超声残留甲状腺 体积与术中残留甲状腺实体标本所测体积、术前三维CT重建下所测甲状腺体积与术中残留甲状腺实体标本所测体积。结果 与术中实体标本所测残留甲状腺体积数据对比,术前超声所测残留甲状腺体积在最大上下径、最大前后径上的差异有统计学意 义(P<0.05),在最大左右径上的差异无统计学意义(P>0.05),颈部CT三维重建下所测的残留甲状腺体积在最大上下径、最大左 右径、最大前后径上的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论超声在对残留甲状腺体积的评估上存在一定的误差,而颈部CT三 维重建技术在评估残留甲状腺体积中更加准确,可为临床计算甲状腺癌术后I131治疗剂量提供更可靠的理论依据。 2019年04月11 00:00 2019年03期 373 553494 汪红娟,陈飞,张永泉,黎志超,王映,李强 外泌体对上皮-间质转化调控作用的研究进展 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201903377 外泌体是一种具有生物活性的膜性囊泡,既可在细胞间传递活性物质,还可通过调控细胞间的信息传递参与细胞活动。 上皮-间质转化(EMT)是上皮细胞获得间充质细胞特性的过程,在众多疾病中发挥了重要作用。研究表明,外泌体在EMT的发 生发展过程中具有双向作用。一方面,外泌体可促进细胞发生EMT,赋予肿瘤细胞侵袭和转移能力,促进血管新生和加快肿瘤 生长;另一方面,外泌体亦可抑制EMT,发挥减弱肿瘤细胞侵袭能力,抑制心、肝、肾纤维化,改善心肌梗死等作用。外泌体可能 是通过携带EMT相关蛋白或miRNA,调控EMT相关信号通路发挥双向调节作用。 2019年04月11 00:00 2019年03期 377 548538 全景羽,卢子滨,余林中,范春林,曹惠慧,刘俊珊