[1]孙懿,曾思聪,卢光琇,等.利用慢病毒载体构建稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系[J].南方医科大学学报,2012,(08):1088.
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利用慢病毒载体构建稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系()
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《南方医科大学学报》[ISSN:1673-4254/CN:44-1627/R]

卷:
期数:
2012年08期
页码:
1088
栏目:
出版日期:
2012-07-15

文章信息/Info

作者:
孙懿曾思聪卢光琇林戈
关键词:
人胚胎干细胞RNA干扰β-catenin
摘要:
目的建立β-catenin稳定干扰的人胚胎干细胞系。方法利用β-catenin慢病毒干扰质粒PLKO.1-puro-β-catenin转染包装
细胞293FT制备重组慢病毒,并感染人胚胎干细胞,采用嘌呤霉素筛选稳定表达shβ-catenin人胚胎干细胞克隆;试验分为稳定
转染β-catenin 干扰质粒组(Shβ-catenin)、稳定转染空白载体组(VECTOR)和对照未感染组(WT)三组,RT-PCR 检测干扰后
β-catenin mRNA表达;进一步免疫荧光检测干扰后细胞β-catenin和OCT4的蛋白表达。结果β-catenin特异性shRNA的慢病
毒感染人胚胎干细胞后,获得稳定表达shβ-catenin的人胚胎干细胞系,Shβ-catenin组β-catenin mRNA表达明显降低,只有WT组
mRNA表达的1%,而VECTOR组和WT组之间无明显差异;免疫荧光染色进一步验证shβ-catenin组中基本无β-catenin蛋白的
表达,但表达多能性标记OCT4。结论通过β-catenin特异性shRNA慢病毒载体构建了稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系。

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更新日期/Last Update: 1900-01-01