[1]荆玉明,罗杰,张艳玲,等.p38丝裂原激活蛋白激酶基因重组慢病毒载体的构建及其在建立人前列腺癌稳定细胞株中的应用[J].南方医科大学学报,2012,(03):317.
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p38丝裂原激活蛋白激酶基因重组慢病毒载体的构建及其在建立人前列腺癌稳定细胞株中的应用()
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《南方医科大学学报》[ISSN:1673-4254/CN:44-1627/R]

卷:
期数:
2012年03期
页码:
317
栏目:
出版日期:
2012-03-01

文章信息/Info

作者:
荆玉明罗杰张艳玲陈三三万沛颜仁和王宏昌陈白虹谭万龙李红卫
关键词:
关键词:p38丝裂原激活蛋白激酶稳定细胞株前列腺癌慢病毒
摘要:
摘要:目的构建p38 丝裂原激活蛋白激酶基因(MAPK)重组慢病毒载体并建立表达外源性p38 基因的人前列腺癌稳定细胞
株。方法采用限制性内切酶酶切、T4 DNA 连接酶连接等方法,将EGFP/p38 融合基因插入慢病毒载体pTYFEF1α-
IRES-EGFP中,构建启动子EF1α调控的EGFP/p38共表达慢病毒载体pTYF-EF1α-EGFP/p38,经酶切鉴定后,利用慢病毒
三质粒系统,通过脂质体法转染包装细胞HEK 293T细胞,收集病毒上清后转导人前列腺癌DU145细胞株,经有限稀释法筛选
重组EGFP/p38稳定细胞株,用Western blotting检测细胞总p38的表达,用计数法绘制细胞的生长曲线。结果经酶切鉴定,成
功构建EGFP/p38重组慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为4.7×106 TU/ml,利用此病毒悬液感染DU145细胞,成
功筛选到EGFP/p38稳定表达细胞株,Western blotting显示该细胞株能稳定表达外源性EGFP/p38融合蛋白,这种过表达p38的
细胞株的生长速度明显低于对照组。结论成功构建p38 MAPK重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38 MAPK基因的稳定
细胞株EGFP/p38-DU145,细胞内p38过表达能够抑制DU145细胞的增殖。

相似文献/References:

[1]王一茹,姚斌伟,张艳,等.FoxM1 shRNA慢病毒载体构建及感染人前列腺癌细胞的稳定细胞株筛选[J].南方医科大学学报,2015,(09):1227.
[2]陈柯,李炳坤,许凯,等.稳定低表达DNA甲基转移酶3b基因对膀胱癌细胞生长和凋亡的影响[J].南方医科大学学报,2015,(11):1524.

更新日期/Last Update: 1900-01-01