[1]杨旭辉,夏添,余伟华,等.慢病毒介导shRNA沉默巢蛋白表达对人黑色素瘤细胞转移特性的影响[J].南方医科大学学报,2012,(01):7.
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慢病毒介导shRNA沉默巢蛋白表达对人黑色素瘤细胞转移特性的影响()
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《南方医科大学学报》[ISSN:/CN:]

卷:
期数:
2012年01期
页码:
7
栏目:
出版日期:
2012-01-01

文章信息/Info

作者:
杨旭辉夏添余伟华卢晓芳项鹏何峰
关键词:
关键词:RNA干扰人黑色素瘤巢蛋白迁移
摘要:
摘要:目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,有效沉默黑色素瘤细胞株UACC903 巢蛋白(nestin)的表达,研究其对黑色素瘤
细胞转移能力的影响。方法以人nestin mRNA编码序列作为干扰靶点,以慢病毒基因PLL3.7 作为质粒载体,构建靶向人
nestin的shRNA表达质粒,另构建不针对任何已知mRNA的阴性对照shRNA表达质粒,分别感染UACC903细胞并流式分选获
得高纯度的nestin 干扰或对照组细胞。应用RT-PCR、免疫荧光及Western blotting 检测不同组别nestin 表达的变化。分别用
Transwell侵袭试验检测跨膜细胞的数量评估各组黑色素瘤细胞的侵袭能力,划痕法检测迁移能力改变。光镜观察各组细胞形
态变化,免疫荧光检测E-cadherin、N-cadherin 和β-catenin 在不同组别的表达变化。结果成功构建nestin shRNA慢病毒载体
nestin-RNAi-LV。RT-PCR 及免疫荧光结果显示干扰组UACC903 细胞nestin mRNA及蛋白表达水平较对照组显著降低。
nestin下调的UACC903细胞黏附、侵袭及迁移能力下降(P<0.05)。结论慢病毒介导的shRNA 能有效地静默食管癌细胞nestin
基因的表达,能抑制黑色素瘤细胞UACC903迁移。
更新日期/Last Update: 1900-01-01