[1]周烨,陈振瑞,贺微,等.哺乳动物细胞表面展示全长类风湿关节炎抗体库的构建[J].南方医科大学学报,2011,(08):1369.
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哺乳动物细胞表面展示全长类风湿关节炎抗体库的构建()
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《南方医科大学学报》[ISSN:/CN:]

卷:
期数:
2011年08期
页码:
1369
栏目:
出版日期:
2011-07-16

文章信息/Info

作者:
周烨陈振瑞贺微娄海波张哲欢刘叔文姜世勃吴曙光李长征周辰
关键词:
哺乳动物细胞表面展示类风湿关节炎抗体基因库全长人源抗体流式细胞仪
摘要:
摘要:目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源类风湿关节炎抗体库。方法分离类风湿关节炎患者的外周血
淋巴细胞,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长轻链基因和重链可变区基因,分别插入哺乳动物细胞表达载体
pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO-10,分别构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,然后将抗体轻链、重链
基因库联合转染293T细胞,用流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建了类风湿关节炎患
者来源的IgG1-Kappa型抗体基因库,随机挑选单克隆经DNA序列分析显示轻链库、重链库的序列正确率分别为80%和
60%,可表达的抗体库多样性为6.13×1010。结论类风湿关节炎抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人
源抗体,所展示的抗体库具有良好的多样性,能够为下一步筛选特异性抗体奠定基础。

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更新日期/Last Update: 1900-01-01