[1]邓海军,孙凯,郭琛,等.人microRNA-338-3p慢病毒表达载体的构建及其靶基因鉴定[J].南方医科大学学报,2012,(08):1098.
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人microRNA-338-3p慢病毒表达载体的构建及其靶基因鉴定()
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《南方医科大学学报》[ISSN:/CN:]

卷:
期数:
2012年08期
页码:
1098
栏目:
出版日期:
2012-07-15

文章信息/Info

作者:
邓海军孙凯郭琛李凌李国新
关键词:
结直肠癌Has-microRNA-338-3pSmoothened慢病毒
摘要:
目的构建人microRNA-338-3p(has-miR-338-3p)慢病毒表达载体并初步筛选鉴定miR-338-3p 的靶基因。方法由
miRBase数据库查找获得miR-338-3p前体序列,设计目的基因片段并人工合成;将miR-338-3p前体序列和pLV-THM 载体经双
酶切后连接,产生pLV-THM-miR-338-3p 慢病毒表达载体,双酶切后测序鉴定,筛选阳性克隆;以pLV-THM-miR-338-3p、
psPAX2和pMD2.G 质粒共转染包装细胞293T,包装产生慢病毒并测定滴度。流式细胞仪筛选建立稳定过表达miR-338-3p的
SW-620亚细胞系,利用Real-time RT-PCR检测miR-338-3p表达,Western-blot检测SMO蛋白表达水平,Transwell小室穿透实
验检测肿瘤细胞转移能力。结果经双酶切鉴定和测序证实,成功构建了miR-338-3p 的慢病毒表达载体pLV-THMmiR-
338-3p,倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293T 表达绿色荧光。稳定过表达miR-338-3p 的SW-620 亚细胞系中,
miR-338-3p 表达水平显著高于阴性对照组和未处理组,SMO蛋白表达水平明显下降,且肿瘤细胞表现出侵袭转移能力的减
弱。结论成功构建了has-miR-338-3p慢病毒表达载体和稳定过表达miR-338-3p的SW-620亚细胞系,初步证实miR-338-3p可
通过抑制结直肠癌细胞中SMO蛋白表达而抑制肿瘤细胞转移,此为进一步深入研究miR-338-3p在结直肠癌中生物学功能奠
定了基础。

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更新日期/Last Update: 1900-01-01