[1]史静,胡晶,肖青,等.重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP 的构建及其对K562 细胞增殖的影响[J].南方医科大学学报,2011,(11):1806.
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重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP 的构建及其对K562 细胞增殖的影响()
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《南方医科大学学报》[ISSN:/CN:]

卷:
期数:
2011年11期
页码:
1806
栏目:
出版日期:
2011-11-15

文章信息/Info

作者:
史静胡晶肖青彭智曹唯希罗秋平王方冯文莉
关键词:
Bcr-AblSH2DED重组腺病毒AD293细胞
摘要:
目的构建表达SH2-DED融合基因的新型重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP,观察其对K562 细胞增殖的抑制作用。
方法重叠PCR扩增SH2-DED融合基因并克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建成穿梭质粒pAdT-SD-EGFP
并进行酶切和测序鉴定。穿梭质粒经Pme I酶切后转化pAd5F35-GFP的BJ5183感受态,通过细菌内同源重组产生重组
腺病毒质粒pAd5F35-SD-EGFP及其突变体,Pac I酶切后转染AD293细胞进行包装。重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP经
PCR 和western blot 鉴定后进行病毒扩增和滴度测定。体外感染K562 细胞,通过MTT 和流式周期检测实验观察
Ad5F35-SD-EGFP对K562细胞增殖的影响。结果PCR、酶切和测序结果均表明pAdT-SD-EGFP和pAd5F35-SD-EGFP
构建成功;PCR、EGFP检测结果证明重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP包装扩增成功,滴度可达1.4×1012 pfu/ml。转染K562
细胞后,Western blot可检测到目的蛋白的表达,MTT实验和流式周期检测结果证明其对K562细胞的增殖有明显的抑制
作用。结论成功构建并鉴定了携带SH2-DED融合基因的重组腺病毒Ad5F35-SD-EGFP,其对BCR-ABL阳性K562细
胞的增殖有明显的抑制作用。
更新日期/Last Update: 1900-01-01