[1]王雪梅,袁远英,方强,等.重组猪单链IL-12 的构建及真核表达[J].南方医科大学学报,2011,(10):1687.
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重组猪单链IL-12 的构建及真核表达()
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《南方医科大学学报》[ISSN:/CN:]

卷:
期数:
2011年10期
页码:
1687
栏目:
出版日期:
2011-10-15

文章信息/Info

作者:
王雪梅袁远英方强夏惠孙新李柏青
关键词:
白细胞介素-12单链分子克隆真核表达CHO-K1细胞
摘要:
摘要:目的克隆猪IL-12 (pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL-12(pscIL-12)融合基因的真核表达质
粒并进行表达。方法分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别
获得pIL-12 p35和p40亚单位编码序列的cDNA,应用重叠延伸PCR技术通过一柔性接头(linker)(Gly4Ser)3串联这两个亚
基构建融合基因pscIL-12,将融合基因pscIL-12插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,通过阳离子聚合物介导转染CHO-K1细
胞进行表达,RT-PCR鉴定pscIL-12 融合基因在真核细胞中的表达。结果所克隆的pIL-12 p35亚基和p40亚基的编码基
因序列和构建的融合基因pscIL-12序列均经PCR、酶切、测序得以证实;融合基因pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录。
结论成功构建了pcDNA3.1(+)-pscIL-12融合基因的真核表达质粒;pcDNA3.1(+)-pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录,
为进一步探讨pscIL-12融合蛋白的生物学活性和疫苗佐剂效应奠定了基础。
更新日期/Last Update: 1900-01-01